脊髓胶质细胞及前炎性细胞因子在慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征大鼠中的作用及机制(2)
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1.5RTPCR检测腰段脊髓IL1β，IL6 和TNFα mRNA的表达
模型组大鼠于建模后第7、14、21天、对照组大鼠于第21天分别随机抽取3只，快速断头处死，冰上取腰段脊髓(L4~5)，匀浆，取匀浆组织约50 mg RIzol法提取总RNA，按试剂说明进行逆转录和PCR，采用Primer 3软件设计PCR引物，以大鼠的βactin mRNA为内参照。
1.6 统计学方法
采用SPSS 12.0版本统计软件处理。所有数据以均数±标准差(x±s)表示，采用方差分析和t检验进行统计学分析。
2 结果
2.1 一般情况和体重变化
所有的实验大鼠包括模型组和对照组，在整个实验观察期一般情况均良好，饮食及体重均无明显变化。
2.2 机械性痛阈(PWT)检测结果
模型组大鼠建模前PWT基础值(Basic line,BL)、建模后第7、9天PWT值与对照组大鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠建模后第11，13，15，17，19，21天， PWT值进行性降低，而对照组(n=6)仍处基线水平，2组在这些时间点比较差异有统计学意义(P< 0.01)，见图1。
图1
CP/CPPS模型大鼠机械性痛阈(PWT)的变化与Control组比较，*P< 0.01
2.3 免疫组织化学检测星形胶质细胞GFAP和小胶质细胞OX42的表达
2.3.1 CP/CPPS模型大鼠建模后第14天，免疫组化显示L4~6脊髓星形胶质细胞的活性标志物GFAP表达明显增多，并持续至第21天。见图2。
图2
CP/CPPS模型大鼠与对照组L4～L6脊髓GFAP免疫组化结果(DAB显色， 10物镜)
A：对照组21 d脊髓GFAP的表达；B～D：模型组7，14，21 d脊髓GFAP的表达
2.3.2 CP/CPPS模型大鼠建模后第7天开始，免疫组化即显示注射长春新碱脊髓小胶质细胞的活性标志物OX42表达明显增多，并持续至第21天。见图3。
图3
CP/CPPS模型大鼠L4～L6脊髓OX42免疫组化结果(DAB显色， 10物镜)
A：对照组21 d脊髓OX42的表达；B~D：模型组7，14，21 d脊髓OX42的表达
2.4 RTPCR结果
RTPCR检测随着时间的变化两组大鼠相应节段脊髓IL1β、IL6和TNFα mRNA的表达。IL1β mRNA表达增加出现在建模后第14，21天，而IL6和TNFα mRNA表达增加出现在建模后第7，14，21天3个时间点，见图4~6。
图4
图5
图5
两组大鼠相应节段脊髓IL6 mRNA表达
1：对照组，2：模型组7 d，3：模型组14 d，4：模型组21 d
与对照组比较 * P<0.05。
图6 ......
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