1 材料与方法

    1. 1 实验动物 8～10周龄的野生型C57BL/6J小鼠购自于广东省医学实验动物中心[许可证号SCXK(粤)2013-0002]。SPF级环境下饲养， 12 h光照， 12 h黑暗， 食物和水自由获取。交配当天晚上以雌雄2∶1的比例合笼， 次日早晨检测雌鼠阴道栓， 阳性者记为E0.5。

    1. 2 RA诱导腭裂模型的构建 分别取E13.5(E13.5组)、E15.5

    (E15.5组)和E17.5(E17.5组)的腭突， q-PCR检测TGFβ1基因的表达， Western blot检测下游p-Smad2(S467)的表达；RA购于上海sigma公司， 模型的构建参照先前的报道进行[2]。

    1. 3 q-PCR检测 分别取各组的胚鼠， 于解剖镜下剪取腭突组织， 加入Trigene试剂提取总RNA， 用RE-TROscript逆转录试剂盒合成cDNA， 用q-PCR(SYBR green)检测的方法， 以β-actin为内参， 分析TGFβ1的基因表达水平。以上试剂均购自北京康润生物公司。

    1. 4 Western blot检测 分别取各组的腭突组织， 于液氮中研磨成粉末 ......