血浆RUNX3基因启动子甲基化检测对宫颈癌早期诊断的价值研究(1)
[摘要]目的探究血浆人类Runt相关转录因子3(RUNX3)基因启动子甲基化对早期宫颈癌的诊断价值。方法选取80例宫颈癌患者作为A组，选取同期80例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为B组，另选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。对三组研究对象的宫颈癌组织、CIN组织、正常宫颈组织及血浆RUNX3启动子甲基化应用甲基化特异性聚合酶链反应(MCP)进行检测。比较三组组织、血浆RUNX3启动子甲基化异常率，分析宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系。结果A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组，差异有统计学意义(P<0.05)。血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性(P<0.05)。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性(P<0.05)。结论血浆RUNX3基因启动子甲基化异常可提示宫颈癌的发生发展，为早期诊断宫颈癌提供新方法。
[关键词]宫颈癌;血浆人类Runt相关转录因子3;宫颈上皮内瘤变;甲基化特异性聚合酶链反应
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.05.004
相关学者与专家认为人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是导致宫颈癌发生的主要病因，宫颈癌的发生、发展是多基因、多因素相互作用与影响形成的。血浆人类Runt相关转录因子3(runt-related transcription factor gene 3，RUNX3)基因是臨床新发现的抑癌基因，作为转化生长因子β(TGF-β)定位于染色体1p36.1，属于Runt基因家族成员之一，其信号作用的靶点可明显抑制多种癌细胞的生长。本研究对80例宫颈癌患者、80例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)患者及80例正常宫颈组织切除者相对应的组织、血浆采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specifie PRC，MCP)方法检验RUNX3启动子甲基化情况，探究其在宫颈癌早期诊断中的应用价值，报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料选取本科2014年3月～2018年12月收治的80例宫颈癌患者作为A组，另选取同期80例CIN患者作为B组，选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。所有人选对象符合相关诊断标准。三组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。本研究经伦理委员会同意。
1.2纳入及排除标准纳人标准：①入选者均符合相关诊断标准;②年龄40～70岁;③所有研究对象均自愿参与，并签署知情书;④术前未接受免疫、化疗、辅助放疗治疗。排除不符合标准的研究对象。
1.3方法检测仪器：采用Zymo Taq PreMi(Zymo Research，美国)、EZDNA甲基化试剂盒，上海生物工程技术服务公司提供NIQ-10柱式动物基因组DNA抽提试剂盒与MSP引物。见表2。检验方法：提取RUNX3基因组DNA，分别对三组研究对象的血浆、宫颈组织、CIN病变组织、正常宫颈组织中按DNA抽取试剂盒，抽取基因组DNA，严格依照说明书进行操作;基因组DNA浓度以紫外分光光度仪测定，根据260nm，与280nm紫外线吸收值比值[D(260nm)/D(280nm)]估计，经浓度0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA浓度，凝胶成像系统成像，用GAPDH与RUNX3光密度比值衡量表达。采用二喹啉甲酸法(BCA)蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度[2，3]。
1.4观察指标.对A、B、C三组血清、相关组织中RUNX3基因启动子甲基化相关性进行评估并比较。
1.5统计学方法采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差(x+s)表示，采用t检验;计数资料以率(%)表示，采用x”检验;相关性采用Spearman相关分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1三组血浆与组织RUNX3启动子甲基化异常情况比较A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。
2.2宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系分析血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性(P<0.05)。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性(P<0.05)。见表4。
3讨论
宫颈癌是我国临床常见恶性肿瘤之一，是威胁女性生命健康的主要因素;其发病率较高。RUNX3是RUNx转录因子家族成员之一，是近年来新发现的抑癌基因，主要在细胞的分化、增值、凋亡过程中发挥重要作用[4-6]。一般而言，肿瘤疾病发生、发展中通常伴随RUNX3的表达下调或沉默，且表达水平与癌细胞转移、细胞分化程度、临床分期存在相关性[7-11]。, 百拇医药(陈海伦 孙颖 唐莉菲)
[关键词]宫颈癌;血浆人类Runt相关转录因子3;宫颈上皮内瘤变;甲基化特异性聚合酶链反应
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.05.004
相关学者与专家认为人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是导致宫颈癌发生的主要病因，宫颈癌的发生、发展是多基因、多因素相互作用与影响形成的。血浆人类Runt相关转录因子3(runt-related transcription factor gene 3，RUNX3)基因是臨床新发现的抑癌基因，作为转化生长因子β(TGF-β)定位于染色体1p36.1，属于Runt基因家族成员之一，其信号作用的靶点可明显抑制多种癌细胞的生长。本研究对80例宫颈癌患者、80例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)患者及80例正常宫颈组织切除者相对应的组织、血浆采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specifie PRC，MCP)方法检验RUNX3启动子甲基化情况，探究其在宫颈癌早期诊断中的应用价值，报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料选取本科2014年3月～2018年12月收治的80例宫颈癌患者作为A组，另选取同期80例CIN患者作为B组，选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。所有人选对象符合相关诊断标准。三组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。本研究经伦理委员会同意。
1.2纳入及排除标准纳人标准：①入选者均符合相关诊断标准;②年龄40～70岁;③所有研究对象均自愿参与，并签署知情书;④术前未接受免疫、化疗、辅助放疗治疗。排除不符合标准的研究对象。
1.3方法检测仪器：采用Zymo Taq PreMi(Zymo Research，美国)、EZDNA甲基化试剂盒，上海生物工程技术服务公司提供NIQ-10柱式动物基因组DNA抽提试剂盒与MSP引物。见表2。检验方法：提取RUNX3基因组DNA，分别对三组研究对象的血浆、宫颈组织、CIN病变组织、正常宫颈组织中按DNA抽取试剂盒，抽取基因组DNA，严格依照说明书进行操作;基因组DNA浓度以紫外分光光度仪测定，根据260nm，与280nm紫外线吸收值比值[D(260nm)/D(280nm)]估计，经浓度0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA浓度，凝胶成像系统成像，用GAPDH与RUNX3光密度比值衡量表达。采用二喹啉甲酸法(BCA)蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度[2，3]。
1.4观察指标.对A、B、C三组血清、相关组织中RUNX3基因启动子甲基化相关性进行评估并比较。
1.5统计学方法采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差(x+s)表示，采用t检验;计数资料以率(%)表示，采用x”检验;相关性采用Spearman相关分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1三组血浆与组织RUNX3启动子甲基化异常情况比较A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。
2.2宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系分析血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性(P<0.05)。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性(P<0.05)。见表4。
3讨论
宫颈癌是我国临床常见恶性肿瘤之一，是威胁女性生命健康的主要因素;其发病率较高。RUNX3是RUNx转录因子家族成员之一，是近年来新发现的抑癌基因，主要在细胞的分化、增值、凋亡过程中发挥重要作用[4-6]。一般而言，肿瘤疾病发生、发展中通常伴随RUNX3的表达下调或沉默，且表达水平与癌细胞转移、细胞分化程度、临床分期存在相关性[7-11]。, 百拇医药(陈海伦 孙颖 唐莉菲)
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