人骨髓间充质干细胞对脑胶质瘤细胞增殖的影响(2)
1.2人骨髓间充质干细胞诱导分化能力的检测
将第2～5代的hMSCs以0.25%胰酶+0.02% EDTA消化，按1×105个/cm2的密度培养于含有B27/N2(美国Gibco BRL)的无血清DMEM/F12培养液，并加入20 ng/ml的EGF和bFGF(美国Sigma)，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。培养液每周更换一次，生长因子每周添加2次。培养10～15 d后，神经球样结构可见形成。将神经球样结构的细胞以4%的甲醛固定，通过常规免疫组化的方法检测神经干细胞标志性蛋白nestin的表达。免疫组化实验所使用的抗体及浓度为：兔抗人nestin，1∶500(美国Chemicon International)和山羊抗兔IgG Cy3，1∶100(美国Chemicon International)。细胞核以DAPI染色。
1.3人骨髓间充质干细胞的条件培养基(hMSCs-CM)的制备
将hMSCs以0.25%胰酶+0.02% EDTA消化，接种于75 cm2的培养皿 ......
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将第2～5代的hMSCs以0.25%胰酶+0.02% EDTA消化，按1×105个/cm2的密度培养于含有B27/N2(美国Gibco BRL)的无血清DMEM/F12培养液，并加入20 ng/ml的EGF和bFGF(美国Sigma)，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。培养液每周更换一次，生长因子每周添加2次。培养10～15 d后，神经球样结构可见形成。将神经球样结构的细胞以4%的甲醛固定，通过常规免疫组化的方法检测神经干细胞标志性蛋白nestin的表达。免疫组化实验所使用的抗体及浓度为：兔抗人nestin，1∶500(美国Chemicon International)和山羊抗兔IgG Cy3，1∶100(美国Chemicon International)。细胞核以DAPI染色。
1.3人骨髓间充质干细胞的条件培养基(hMSCs-CM)的制备
将hMSCs以0.25%胰酶+0.02% EDTA消化，接种于75 cm2的培养皿 ......
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